:: جلد 16، شماره 3 - ( پاییز 1398 ) ::
جلد 16 شماره 3 صفحات 194-200 برگشت به فهرست نسخه ها
راه‌اندازی روش Real-Time PCR جهت تعیین بار پرووایرال ویروس لنفوتروپیک T انسانی نوع I به روش سایبرگرین جهت نمونه‌های اهداکنندگان خون
حمیده قاسم زادگان، دکتر مجید شهابی، دکتر نگار رضایی، دکتر زهره شریفی
استاد مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پزوهشی طب انتقال خون
چکیده:   (577 مشاهده)
چکیده
سابقه و هدف
استان خراسان در ایران برای ویروسHTLV-1  اندمیک است. با توجه به ناکارآمد بودن آزمایش‌های سرولوژیکی در شناسایی ویروس‌ها در دوره کمون، تایید جواب‌های نامشخص وسترن بلات و خطر انتقال ویروس HTLV-1 از راه خون و فرآورده­های خونی، آزمایش Real – Time PCR به روش سایبرگرین راه‌اندازی شد. نمونه­های مورد آزمایش، مربوط به اهداکنندگان خون آلوده به این ویروس در پایگاه انتقال خون استان خراسان رضوی در سال 1396 بودند.
مواد و روش‌ها
در یک مطالعه تجربی، با استفاده از روش کلونینگ و رسم منحنی استاندارد، آزمایش Real - Time PCR برای تعیین پرووایرال لود راه‌اندازی شد. ابتدا  DNAژنومی از سلول‌های تک هسته‌ای خون محیطی استخراج شد. سپس محصول  PCR ژن Tax ، در یک وکتور کلونینگ قرار داده شد و با رقت‌سازی، منحنی استاندارد رسم و آزمایش Real – Time PCR با روش سایبرگرین راه‌اندازی شد.
یافته‌ها
با استفاده از محصول PCR برای ژن  Tax، وکتور pTZ57/T و باکتریE.Coli  (سوش TG1) کلونینگ انجام شد. صحت کلونینگ با Colony PCR و تعیین سکانس تایید شد. محصول کلونینگ به عنوان استاندارد آزمایش Real –Time PCR  استفاده شد و با رقت‌سازی، منحنی استاندارد رسم شد. شیب خط منحنی استاندارد 3/3 slope= و 99/0 = 2R بوده که نشان­دهنده خطی بودن و کارآیی واکنش آزمایش می‌باشد.
نتیجه گیری
روش Real –Time PCR  جهت تعیین پرووایرال لود ویروس HTLV-1 مناسب است.

 
واژه‌های کلیدی: ویروس HTLV-1، پروویروس، Real Time PCR
متن کامل [PDF 476 kb]   (252 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: ويروس شناسي


XML   English Abstract   Print



جلد 16، شماره 3 - ( پاییز 1398 ) برگشت به فهرست نسخه ها