[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: آرشيو مقالات :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: جلد 14، شماره 1 - ( بهار 1396 ) ::
جلد 14 شماره 1 صفحات 53-64 برگشت به فهرست نسخه ها
جداسازی، همسانه‌سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی
مهسا نایب هاشمی، دکتر مهشید محمدی پور، دکتر حسین فهیمی، دکتر مهریار حبیبی رودکنار، دکتر محمدعلی جلیلی *
PhD شیمی دارویی استادیار مرکز تحقیقات انتقال خون ـ مؤسسه عالی آموزشی و پژوهشی طب انتقال خون
چکیده:   (433 مشاهده)

چکیده

سابقه و هدف

فاکتور سلول بنیادی(SCF)، یک گلیکوپروتئین 28 تا 40 کیلودالتونی است که نقش مهمی را در تکثیر و تمایز سلول­های بنیادی خونساز(HSCs) بازی می­کند. هدف این مطالعه­ جداسازی، کلونینگ و بیان SCF در میزبان بیانیRosetta  بود. Rosetta علاوه بر ویژگی­های میزبان بیانی پروکاریوتی، انتظار می‌رفت با فراهم کردن کدون­های نادر پروتئین­های یوکاریوتی، سطح بیان پروتئین نوترکیب را افزایش دهد.

مواد و روش‌ها

مطالعه انجام از نوع تجربی بود. RNA تام از سلول‌های Hela استخراج و به دنبال آن cDNA ساخته شد. توالی رمزکننده­ SCF ، به وسیله آغازگرهای اختصاصی جداسازی و تکثیر شد و با استفاده از وکتور بیانی pET-32a در E.coli TOP 10 همسانه‌سازی شد. سازه نوترکیب به وسیله PCR ، هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید ‌شد. وکتور نوترکیب در میزبان بیانی Rosetta تراریخت ‌شد. بیان  SCF نوترکیب در حضور IPTG القا شد. بیان فاکتور سلول بنیادی انسانی(hSCF) با SDS-PAGE و وسترن بلات ارزیابی و تایید شد.

یافته‌ها

توالی رمزکننده SCF با موفقیت از سلول‌های Hela جداسازی و در وکتور بیانی pET-32a همسانه‌سازی و بیان پروتئین نوترکیب در میزبان بیانی Rosetta انجام شد.

نتیجه‌گیری

در سیستم بیانی Rosetta ، امکان تولید پروتئین‌های یوکاریوتی با کدون‌های نادر مثل AGG ، AGA ، AUA ، CUA ، CCC و GGA وجود دارد بنابراین به میزان بالایی پروتئین فاکتور سلول بنیادی تولید می‌شود.

واژه‌های کلیدی: کلمات کلیدی: گلیکوزیلاسیون، سلول بنیادی، PCR
متن کامل [PDF 492 kb]   (196 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: بيوتكنولوژي
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

کد امنیتی را در کادر بنویسید >



XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Nayebhashemi M, Mohammadi pour M, Fahimii H, Habibi Roudkenar M, Jalili M A. Isolation, cloning and expression of human stem cell factor using prokaryotic expression system . Sci J Blood Transfus Organ. 2017; 14 (1) :53-64
URL: http://bloodjournal.ir/article-1-1060-fa.html
نایب هاشمی مهسا، محمدی پور مهشید، فهیمی حسین، حبیبی رودکنار مهریار، جلیلی محمدعلی. جداسازی، همسانه‌سازی و بیان فاکتور سلول بنیادی با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی. فصلنامه پژوهشی خون . 1396; 14 (1) :53-64

URL: http://bloodjournal.ir/article-1-1060-fa.html

جلد 14، شماره 1 - ( بهار 1396 ) برگشت به فهرست نسخه ها
فصلنامه پژوهشی خون Scientific Journal of Iran Blood Transfus Organ
The Scientific Journal of Iranian Blood Transfusion Organization - Copyright 2006 by IBTO
Persian site map - English site map - Created in 0.058 seconds with 791 queries by yektaweb 3461